技術文章
Technical articles(1)復制方法 采用經額蛛網膜下腔插管直達大腦動脈(Willis)環處2次注血制成大白鼠蛛網膜下腔出血后DCV模型。
健康大鼠,體重為200~250g,雌雄不拘,經腹腔注射水合氯醛(按350~400mg/kg體重的劑量)或戊丨巴丨比丨妥丨鈉(按50~60mg/kg體重的劑量)麻醉大鼠,剃除頭頂部毛發,手術區域皮膚消毒。切開頭頂部中線皮膚,鈍性分離肌肉及骨膜。距前囟前5mm、中線旁3mm處用電動牙科鉆鉆孔達腦膜,此骨孔恰好在前顱窩底與額極交接處。適當擴大骨孔,在手術顯微鏡下小心挑破腦膜,當清亮腦脊液流出時將PC-10塑料管指向雙耳連線中點、緊貼前顱底蛛網膜下腔送入,深度8~10mm(經解剖測量此長度導管頂端恰位于大腦動脈(Willis)環前部),連接注射器回抽有清亮腦脊液而無血液,提示穿刺成功。用骨蠟封閉骨創口,縫合肌肉并固定穿刺管。再于距前囟后3mm、中線旁3mm處左或右鉆一骨孔,挑破腦膜,插入測量電極于皮層內(深度1mm),用于局部腦血流(rCBF)的測定。
斷尾取自體血150μl經PC-10管緩慢注入蛛網膜下腔后,灼封塑料管并縫合皮膚。24h后同上述麻醉固定,剪開塑封管,再次注入自體血100μl。于末次注血6h后用生理
鹽水灌冼,4%多聚甲醛灌注固定,先快后慢,斷頭取腦,行大體及形態學觀察。也可于末次注血6h后先進行腦血管造影以觀察全腦血管痙攣情況。方法:麻醉后切開頸部皮膚,分離頸總動脈,經頸內動脈插管至顱底,注入60%泛影葡胺1ml進行全腦造影。
(2)模型特點 rCBF測定顯示局部血流量明顯降低。大體觀察可見大量血液積聚于大腦動脈(Willis)環處,大腦前中動脈、基底動脈均被陳舊性血凝塊包裹,前顱窩底、蝶鞍及后顱窩處均有陳舊性血凝塊殘留。微血管形態學觀察可見微血管管徑縮小。圖像分析可見血管總面積、血管數及平均血管面積均明顯降低。
(3)比較醫學 目前對DCV產生的機制有諸多觀點,但多傾向于是一種功能改變而非結構改變。由于進行灌注固定時灌注壓、pH值、理化因素等對大動脈的影響,觀察大動脈的病變并不能真實地反映DCV的改變。以微血管的改變來反映DCV比大腦動脈環周圍大血管的改變來反映更可靠。經小腦幕上蛛網膜下腔直達大腦動脈環周圍的直接注血法更加真實地模擬了SAH的病理過程,且操作簡單,出血易于控制,是一個較為可靠的SAH模型。由于該模型可重復性好,適用于DCV的研究。